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       Western Blot即免疫印跡法（fǎ）（蛋白質印（yìn）跡法）是分子生（shēng）物學、生物化學和免疫遺傳學中常用的一種實驗方法（fǎ）。與Southern Blot、Northern Bolt類似，不同的是，Southern Blot與Northern Blot檢測的物質分別為DNA、RNA，Western Blot檢（jiǎn）測的是蛋白質。

原理

       ●Western Blot：采用的是聚（jù）丙烯酰胺凝膠電泳，被檢測物  是蛋白質，“探針”是抗體，“顯色”用標記的（de）二抗。

      ● 經（jīng）過PAGE分（fèn）離的蛋白質樣品，轉移到（dào）固相載體（例如硝酸（suān）纖維素薄膜）上，固相（xiàng）載體以非共（gòng）價鍵形式吸附蛋白（bái）質（zhì），且能保持電泳分離的多肽類型及其生（shēng）物學活性不變。以固相載體上的蛋白質或多肽作為抗原，與對應的抗（kàng）體起免疫反應，再與酶或同位素標記的第（dì）二抗體起反應，經過底物顯色或放射自顯影（yǐng）以檢測電泳分離的特異性目的基因（yīn）表達的蛋白成分。

       ● 免疫印（yìn）跡（jì）法所檢測的蛋白樣品主要來自於人工（gōng）構建的細胞株係，包括微生物（wù）與動植物細（xì）胞，也可從（cóng）實驗動物體獲得。

       ● 將樣本裂解後，采（cǎi）用（yòng）有機溶劑或水溶法分離（lí）總蛋白後，再進行層析或點洗（xǐ）脫製備目的蛋白後，在蛋白中加入等量Loading Buffer煮沸變性（xìng）就可以進行SDS-PAGE凝膠電泳的步驟了。

       ● SDS（十二烷基硫酸鈉） 是一種離子性（xìng）的界麵活性劑,它有強離子性的硫酸根離子也帶（dài）有疏水性的長碳鏈。當 SDS 與蛋白質混合時，它會（huì）以其碳鏈與蛋白質之疏水性胺基酸結合將蛋白質包起來，而以硫酸根離子外（wài）露與水分子作用。大多數蛋白質和 SDS 的平均（jun1）結合量是 1:1.4 (以重量（liàng）為單位)，而蛋白質和SDS結合後,由於 SDS 帶強負價，使蛋（dàn）白質原先的帶電價微（wēi）不足道,且（qiě）每單位（wèi）重量的蛋白質帶電價一（yī）致，所以決定不同蛋白的泳動速率就隻剩下分子大小一項因素。